Isıl İşlem Görmüş Sütlerde Salmonella Typhimurium Canlı Hücrelerinin PMA/Real-Time PCR ile Belirlenmesi

Özet

Gıdaların üretimi sırasında uygulanan farklı teknolojik işlemler bakteriler üzerinde öldürücü etki göstermesine rağmen, bu bakterilere ait DNA‘lar belirli bir süre varlıklarını korudukları için real- time PCR tekniği ile tespit edildiklerinde yanlış pozitif sonuçlara neden olabilmektedirler. Real- time PCR tekniğinin bu eksikliğini gidermek amacıyla son yıllarda DNA ekstraksiyonu öncesinde, ölü hücrelere ait DNA‘ların Propodium Monoazide (PMA) ile muamele edilerek ortamdan uzaklaştırılmasına dayanan yeni bir yöntem geliştirilmiştir. Bu çalışmada ise, ısıl işlem uygulanmış süt örneklerinde, S. Typhimurium‘un canlı hücrelerinin tespiti için real-time PCR yöntemi, PMA uygulaması ile kombine edilmiştir. Bu amaçla S. Typhimurium ile inokule edilen süt örneklerine farklı sıcaklık (60, 65, 70 ve 75ºC) ve sürelerde (15, 60, 300 ve 900 sn) ısıl işlem uygulanmış ve canlı bakteri sayısı, direkt real-time PCR, PMA/real-time PCR ve klasik kültüre alma yöntemleriyle karşılaştırmalı olarak belirlenmiştir. Sonuçta test edilen tüm sıcaklık derece ve sürelerinde PMA/real- time PCR yönteminin direkt real-time PCR tekniğinin aksine ölü hücrelerden kaynaklanan yanlış pozitif sonuçları belli bir dereceye kadar önlediği ancak kültürel sayım sonuçlarına kıyasla daha yüksek sonuçlar verdiği belirlenmiştir. Dolaysıyla PMA/real-time PCR yöntemi ile elde edilen yüksek pozitif sonuçları elemine etmek için, PMA uygulamasına ait koşulların optimizasyonuna yönelik daha ileri çalışmalara ihtiyaç olduğu sonucuna varılmıştır.